John E. Walker dilahirkan di Halifax, Yorkshire, Inggris pada tanggal 7 januari 1941. Ayahnya adalah seorang tukang batu, pianis amatir berbakat dan seorang vokalis. Pada tahun 1964, dia memperoleh gelar B.A. di bidang kimia dari St.Catherine's College, Oxford, dan gelar D.Phill. setelah melalukan penelitian dalam pengkajian antibiotik peptida bersama E. P. Abraham di Sir William Dunn School of Pathology, Oxford. Lima tahun kemudian, dia bekerja di The School of Pharmacy di University of Wisconsin, di CNRS di Gif-sur-Yvette dan kemudian di  Institut Pasteur in Paris. Pada tahun 1974, dia bergabung pada lembaga Protein and Nucleic Acid Chemistry (PNAC) MRC Laboratory of Molecular Biology, Cambridge. Pada tahun 1998, dia pindah ke unit MRC’s Dunn Human Nutrition.

Dia membantu untuk uncover details kode genetik termodifikasi pada mitokondria. Pada tahun 1978, dia menggunakan metode zat kimia protein pada enzim oksidatif fosforilasi dari membran inner mitokondria. Kajian ATP sintase dari mitokondria jantung sapi dan dari eubakteria menghasilkan analisis urutan yang lengkap. Sepanjang tahun 1990, dia bekerjasama dengan ahli kristalograf untuk mengklarifikasi struktur tiga dimensi ATP sintase. Pekerjaan ini melengkapi kajian Paul D. Boyer dalam mengungkap fungsi ATP sintase dan khususnya penggunaan energi untuk menghasilkan ATP baru. Struktur yang dihasilkan olehnya menunjukkan kebenaran mekanisme yang diusulkan oleh Boyer.

Pada tahun 1959, dia memperoleh A. T. Clay Gold Medal, pada 1994, Johnson Foundation Prize Foundation Prize dari University of Pennsylvania, dan pada 1996, CIBA Medal dan Prize of the Biochemical Society. Tahun berikutnya, dia dianugerahi Peter Mitchell Medal dari European Bioenergetics Congress dan The Gaetano Quagliariello Prize untuk riset mitokondria dari University of Bari, Italia. Pada tahun 1995 dia memiliki wewenang untuk memilih penerima Fellow of the Royal Society dan dua tahun kemudian, dia membuat Fellow of Sidney Sussex College, Cambridge dan Honorary Fellow, St. Catherine's College, Oxford. Dia berbagi Nobel Prize pada tahun 1997 bersama Paul D.Boyer untuk elusidasi mekanisme enzimatik yang mendasari sintesis adenosin trifosfat (ATP) dan  Jens C. Skou untuk penemuan ion-transporting enzyme, Na+, K+-ATPase.

---